WWW.KNIGA.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Онлайн материалы
 

«ФАРМАКО-ПРОФИЛАКТИКА ОСТРЫХ ПОСЛЕРОДОВЫХ ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ ...»

На правах рукописи

НОВИКОВА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА

ФАРМАКО-ПРОФИЛАКТИКА ОСТРЫХ ПОСЛЕРОДОВЫХ

ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.06 – ветеринарное акушерство и биотехника

репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Краснодар – 2013

Работа выполнялась в лаборатории акушерства и гинекологии сельскохозяйственных животных Краснодарского научноисследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии и в некоторых хозяйствах Краснодарского края.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Коба Игорь Сергеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук Кузьминова Елена Васильевна кандидат ветеринарных наук Белугин Николай Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Саратовский Государственный аграрный университет»

Защита состоится «04» июля 2013 г. в 12оо часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 в Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.



Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://www.kubsau.ru «30» мая 2013 г. и официальном сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «___» июня 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук И.А. Родин

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Увеличение производства животноводческой продукции, наряду с совершенствованием породных и продуктивных качеств животных, тесно связано с состоянием воспроизводства стада. По мнению многих специалистов В.Я. Никитин (1972), Е.В. Ильинский (1972), А.Г. Нежданов (1987), А.Н. Турченко (1999), А.Н. Шевченко (2006), С.С. Дегтярева (2008), И.С. Коба (2003, 2009), Е.В. Громыко (2010) и др., фактором, сдерживающим воспроизводство стада в значительной мере, является наличие острого послеродового эндометрита.

Эндометрит обуславливает длительное бесплодие, безрезультатное осеменение и высокую степень яловости коров (М.В.Назаров, И.В. Коваль и др, 2012). Несмотря на значительные успехи ветеринарной науки и практики в области диагностики, терапии и профилактики акушерско-гинекологических болезней частота их проявления у молочных, особенно высокопродуктивных, коров не имеет тенденции к снижению (А.Н. Турченко, 1988). Акушерскогинекологическая патология животных остается острой проблемой для хозяйств Краснодарского края.

Лечение эндометрита у коров приводит к контаминации, прямо или косвенно, молока и мяса лекарственными компонентами:

антибиотиками, сульфаниламидами, нитрофуранами и другими, которые не позволяют вести полную переработку молока и мяса, вызывают токсикозы и аллергические реакции у человека и молодняка животных (Е.

Курыкин, Н.Гасанов (1975)). Такая продукция во многих странах Европы и Америки запрещена к производству.

В связи с этим актуальным направлением в ветеринарном акушерстве является разработка новых пробиотических средств и технологии их введения в систему профилактики и терапии эндометритов у продуктивных животных.





Цели и задачи исследований Цель работы состояла в повышении эффективности профилактических мероприятий для предупреждения заболевания коров острым послеродовым эндометритом с использованием пробиотических средств, а также проведение фармако-токсикологической оценки нового пробиотического препарата гипролам.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- Изучить степень распространения острого послеродового эндометрита у коров в нескольких хозяйствах Краснодарского края;

- изучить микробный фон матки коров в первые 15 дней после отела и микробный пейзаж матки у больных эндометритом коров;

- разработать новый пробиотический препарат для профилактики послеродовых эндометритов у коров и изучить его фармакотоксикологические свойства.

Научная новизна. Определена степень распространения острого послеродового эндометрита в условиях Краснодарского края, изучен микробный фон матки коров в первые 15 дней после отела и микробный пейзаж матки у больных эндометритом коров. Разработан новый пробиотический препарат Гипролам для профилактики послеродовых эндометритов у коров. Впервые дано экспериментальное и клиническое обоснование его применения в ветеринарной гинекологии, изучена его антимикробная активность, определена оптимальная профилактическая доза и схема его применения, дана оценка профилактической эффективности препарата в сравнительном аспекте с другими аналогичными по действию средствами.

Практическая значимость. Установлена степень заболеваемости коров в хозяйствах Краснодарского края острым послеродовым эндометритом.

Проведены научные исследования по выяснению некоторых причин заболеваемости коров эндометритом. Предложен новый пробиотический препарат для профилактики наиболее актуальных заболеваний репродуктивного тракта у коров: задержание последа, субинволюции матки, острого послеродового эндометрита у коров. По результатам проведенных исследований были разработаны и утверждены: Временные технические условия на препарат гипролам ТУ №9291-012-74267440-2012 и временная инструкция по применению препарата Гипролам для профилактики острого послеродового эндометрита у коров (в порядке широкого производственного опыта) в Краснодарском крае и республике Адыгея в 2012г. Подана заявка на патент №2012146498 и №2012146497 Апробация результатов исследований. Результаты исследования и основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях ученого совета Краснодарского НИВИ (2010-2013), на Международной научно-практической конференции, посвященной 90летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета: опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения и на международной научно-практической конференции, посвященной 65летию ветеринарной науки Кубани: «Актуальные проблемы современной ветеринарии».

Публикации материалов диссертации.

По материалам диссертационной работы опубликовано 9 научных работ:

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 145 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, списка литературы и приложений. Список использованной литературы включает 224 источника, в том числе 20 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 14 рисунками.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Распространение острого послеродового эндометрита в стадах коров при различной технологии ведения молочного скота с круглогодичным стойловым содержанием.

2. Микробный фон матки больных острым послеродовым эндометритом и здоровых коров.

3. Материалы разработки препарата гипролам, изучение его специфических свойств и результаты определения оптимальной профилактической дозы и схемы применения пробиотического препарата гипролам, предложенного для профилактики острого послеродового эндометрита у коров с целью недопущения симптоматического бесплодия животных.

2. Собственные исследования 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 2010 по 2013 год в лаборатории акушерства и гинекологии сельскохозяйственных животных Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института, а так же в хозяйствах Краснодарского края: ОАО «им. Ильича»

Выселковского района, ОАО «Прогресс» Гулькевического района, ООО филиал Смоленский «Предгорье Кавказа» Северского района, ЗАО АФ «Искра» Тимашевского района, ООО «ЮКа» Брюховецкого района.

Исследованию были подвергнуты: 5514 коров голштинской породы, было исследовано 120 проб цервикально-маточной слизи, 60 проб крови, 163 лабораторных животных.

Изучение степени распространения послеродового эндометрита у крупного рогатого скота проводили в некоторых сельскохозяйственных предприятиях Краснодарского края. Используя акушерскогинекологическую диспансеризацию скота согласно методике В.А.

Акатова (1976) и Н.И. Полянцева (1989).

Состояние половых органов коров определяли клиническими методами, которые подразделялись на наружные, вагинальные и ректальные исследования.

При наружном исследовании животных у них устанавливали состояние вульвы, наличие или отсутствие выделений из половых органов, их цвет, запах и консистенцию.

Вагинальное исследование проводили при помощи влагалищного зеркала и модифицированного прибора «Циклоп М». При этом учитывали состояние слизистой оболочки влагалища и влагалищной части шейки матки, их целостность, положение шейки матки и степень раскрытия ее канала, а также характер и объем маточных выделений.

Ректальным исследованием устанавливали, величину, форму матки и рогов, наличие в них содержимого, тонус маточной стенки, а также определяли величину яичников и наличие в них фолликулов или желтых тел.

Кроме клинических методов исследования для наиболее точного определения состояния родового аппарата животного проводили и лабораторные: морфологические исследования крови, биохимический анализ сыворотки крови, определяли видовой состав микрофлоры маточных выделений и ее патогенность.

Для определения видового состава микрофлоры, выделенной из половых органов коров, нами было исследовано 120 проб маточных выделений от больных и здоровых животных. Взятие проб проводили по методике Н.Н. Михайлова, М.А. Лучко и З.С. Коновой (1967). Из взятых проб делали посевы на МПБ, МПА, МПА с 5% дефибринированной крови барана, МПА с 7,5% натрия хлорида, МПА с 1% глюкозой, среду Эндо, среду Сабуро, цветные среды Гисса. Чашки Петри с посевами помещали в термостат при +38°С для культивирования микроорганизмов.

Культуральные свойства определяли по внешнему виду колоний микроорганизмов, характеру роста на питательных средах. Учитывали форму колоний, размер, цвет, прозрачность, характер поверхности. При посевах на кровяной агар учитывали наличие или отсутствие зоны гемолиза.

Для определения вида бактерий использовали пластины биохимические дифференцирующие энтеробактерии и стафилококки научно-производственного объединения «Диагностические системы», г.

Нижний Новгород, углеводные среды Гиса. Видовую принадлежность бактерии устанавливали, руководствуясь «Определителем бактерий»

Берги (1980) и рекомендациями Н.Н. Михайлова (1983), В.М. Карташовой с соавт. (1988), а грибов - «Определителем патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов» (1979) и также «Атласом грибов патогенных для сельскохозяйственных животных и птиц» (1953).

Идентификацию проводили с учетом морфологических и культуральных и биохимических свойств микробов по общепринятым методикам (Сидоров М.А. 1982).

Патогенность изучали при внутрибрюшинном заражении белых мышей массой 16-18г 1 млрд взвесью микробных клеток в мл смытой с агаровой культуры в дозе 0,2-0,5мл (200-500млн микробных клеток).

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводили на среде АГВ путем наложения стандартных дисков с антибиотиками, а также луночным методом и методом последовательных серийных разведений в МПБ.

Кровь для морфологических и биохимических исследований брали от коров до кормления. При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в камере с сеткой Горяева, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, содержание гемоглобина (гемоглобинцианидным методом), высчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова, характер лейкограммы (микроскопией окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках крови).

Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно). Активность трансаминаз, щелочной фосфатазы, билирубин, - с помощью наборов фирмы «ДДС».

Для изучения антагонистической активности штаммов Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactococcus lactis subsp. Lactis 574 которые входят в разработанный нами препарат использовали «чашечный» метод М.

Литвинова (1947) в модификации Н.С. Егорова (1965). В чашки с средой Мерка, засевали бульонной культуры штамма-пробионта.

Термостатировали при 37 0 С в течение 48 часов. Через 2 суток из чашки удаляли половину агаровой пластинки с выросшим на ней пробионтом и в свободную часть чашки заливали СПА. После застывания среды на нее сплошным газоном засевали тест-микроб. Результат учитывали через 24 часа по зоне задержки роста между пробионтом и тест-микробом.

Определение бактериологической чистоты проводили в соответствии с ГОСТ 28085 «Препараты биологические. Метод биологического контроля стерильности».

Для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в препарате гипролам в течение срока его хранения отбирали образцы препарата и проводили анализ путем подсчета жизнеспособных микроорганизмов..

Число жизнеспособных клеток в млн/см3 определяли по формуле:

Х=N x10p, где N- количество выросших колоний (среднее арифметическое из двух параллельных чашек) p- порядковый номер десятикратного разведения.

Качество органических кислот в препарате определяли на аппарате Капель методом капиллярного зонного электрофореза.

Кислотность препарата определяли методом определения кислот по Тернеру.

Острую и хроническую токсичность, в том числе раздражающее действие на слизистую оболочку глаза и кожно-резорбтивное действие препарата гипролам определяли согласно методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических средств, методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных; ГОСТу Р 54063-2010 «Средства лекарственные для животных. Методы определения безвредности»; Методическим указанием по изучению общетоксического действия фармакологических средств.

Изучение раздражающего действия на слизистые оболочки глаз препарата гипролам проведено на трх кроликах альбиносах согласно ГОСТ Р ИСО 10993.10-99. Каждому животному в нижний отдел конъюнктивального мешка правого глаза вносили препарат в дозе 0,1см 3.

Второй глаз служил контролем. Обследование животных проводили через 10, 30, 60 минут, а в дальнейшем через 24, 48 и 72 часа после внесения препарата. При этом оценивали роговицу, радужную оболочку, конъюнктиву, хематоз и наличие выделений.

Изучение кожно-резорбтивного действия проводили на 3-х кроликах

– альбиносах, которым за сутки до эксперимента тщательно выстригали шерсть на симметричных участках обоих боков, один из которых служит контролем. На кожу накладывали марлевый тампон, смоченный в тестируемом препарате Гипролам, с 4-х-часовой экспозицией. Оценка местного действия препарата на кожу оценивалась сразу после окончания экспозиции, а также через 24, 48 и 72 часа.

Изучение сенсибилизирующего действия препарата гипролам проводили на 15 морских свинках-альбиносах массой 300-330 г в соответствии с «Оценкой биологического действия медицинских изделий.

Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия»

(ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009). Поверхность участков осматривали через 24, 48 и 72 часа после снятия повязки. Описывали и оценивали степень кожной реакции.

В рекогносцировочных опытах устанавливали оптимальную профилактическую дозу для разработанного препарата гипролам.

Профилактическую эффективность препарата гипролам осуществляли в сравнительном аспекте, в серии научно-хозяйственных опытов с разделением коров по принципу пар-аналогов при одинаковых условиях их кормления, содержания и эксплуатации. При этом в контрольных группах в качестве профилактических средств использовали традиционное средство рихометрин и пробиотик – моноспорин.

За коровами вели тщательное наблюдение и учитывали их клиническое состояние, качество и количество истечений, на 13-15 день проводили ректальные исследования, определяли величину, ригидность матки, степень ретракции мышечных волокон.

Нами проводилась курация животных заболевших острым послеродовым эндометритом после проведенных профилактических мероприятий. В результате было отобрано 3 группы животных. В первую опытную группу (9 коров) вошли животные, которым на стадии профилактики применяли гипролам, в контрольную - 1 (28 животных)– коровы, которым вводили рихометрин, и в контрольную – 2 (23 коровы) – моноспорин. Всех этих животных лечили по одной схеме наиболее часто применяемой в хозяйствах. Для лечения использовались внутриматочный антибактериальный препарат Эндометромаг-К, тканевый препарат ПДЭ и утеротон. Все эти препараты вводили согласно инструкции по применению. За животными вели наблюдение, отмечая количество дней лечения, кратность введения препаратов, терапевтическую эффективность применяемой схемы лечения и количество дней бесплодия животных.

Математическую и биометритческую обработку полученных данных проводили при помощи программы Windows XP, Microsoft Excel 2007, степень достоверности «Р» устанавливали по распределению Стьюдента.

–  –  –

послеродовым эндометритом на 10,6% чаще, чем в хозяйствах с привязным содержанием животных, находящихся на пассивном моционе (корпус-баз).

Также своими исследованиями мы подтвердили то, что заболеваемость коров неспецифическим послеродовым эндометритом имеет определенный сезонный характер и колеблется в зависимости от сезона года. Наиболее низкий уровень заболеваемости коров эндометритом наблюдается в осенний период и составляет 40,5%, зимой же он увеличивается до 68,8%.

Нами были проведены исследования, благодаря которым мы установили время проявления острого послеродового эндометрита после отела. Для этого были проведены клинические исследования на 120 коровах голштинской породы. За животными вели наблюдение с момента отела в течении 20 дней и диагностировали эндометрит по выделениям из матки, а также при определении состояния матки путем вагинального и ректального исследования.

Под наблюдением находилось 120 коров, из них заболело эндометритом с 1-го по 20 день наблюдения 49 животных, что составляет (40,8%) По нашим данным заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом растет первые 8 дней. Так на 4-й день она составляет 28,6%, а к 5-8 дню достигает 30,6%. В дальнейшем наблюдается тенденция к снижению заболевания с 24,5% к 9-11дню до 2% к 20 дню и в дальнейшем не регистрируется.

Проведенные исследования показывают, что заболеваемость коров неспецифическим послеродовым эндометритом в хозяйствах Краснодарского края является актуальной проблемой. Причем процент заболеваемости коров данным заболеванием находящихся круглогодично в корпусах на беспривязном содержании выше, чем на фермах где животные содержаться на привязи и имеют пассивный моцион в базах.

Также установлено, что наиболее часто животные заболевают послеродовым эндометритом на 5-8 день после отела.

3.2. Микробный фон матки больных эндометритом и здоровых коров в хозяйствах.

Нами была проведена работа по изучению микрофлоры матки у коров в первые 15 дней после отела. Были взяты смывы из шейки матки у 40 здоровых коров в первые 15 дней после отела. В 45% случаев пробы, взятые на 1-3 день после отела, оказались стерильными. В 15% микроорганизмы представлены монокультурами стафилококков. В 40% выделяли ассоциации микроорганизмов в различных сочетаниях: E.coli + Kl. pneumonia (18,75%), E.coli + Pr. mirabilis (12,5%), Sh. desinteriae + Sh.

flexneri(25%), Sh.boudi+Sh.sonnei (25%), E.coli + C. albicans (12,5), Ps.

aeruginosa + Asp. flavus (6,25%).

На 5-8 день у здоровых животных в 65% случаях была выделена микрофлора в монокультуре: St. аureus –23,1%, P. vulgarus –23,1%,E. coli – 15,4%, Str. pyogenes –13,4%, St. epidermidis –13,4% K. pneumoniae –7,7%. В ассоциациях микроорганизмы были выделены у 15% животного: St. аureus + E. coli +K. pneumonia – 66,7%. St. аureus + E. coli – 33,3%, У 20% животных микрофлора не выделена.

К 9-15 дню в основном, у животных этой группы в (55%) выделяли монокультуры: St. аureus у 36,4% животных, E. coli – у 36,4%, K.

рneumoniae – у 18,2%, Str. pyogenes – у 9,1% коров. В ассоциациях микрофлору выделяли у 30% животных, которая была представлена следующими культурами микроорганизмов: St. аureus + E. coli – 18,2%, St. аureus + E. coli + P. mirabilis – 18,2%, K. pneumoniae + St. аureus + E. coli

– 9,1%, St. аureus + E. coli + P. vulgaris- 9,1%. У 15% животных из содержимого матки микрофлора не выделена.

Выделенные микроорганизмы из содержимого матки здоровых животных не обладали гемолитической активностью, были не патогенны для лабораторных животных.

При исследовании смывов из шейки матки у больных эндометритом коров (96 животных). Установлено, что 25% коров выделяются микроорганизмы в виде монокультур. Из них 62,5% составляют энтеробактерии, 25% стафилококки, 12,5% - шигеллы. Ассоциации микроорганизмов были изолированы у 75% и представлены в различных сочетаниях: E.coli + St. aureus – 41,7%, E.coli + St. aureus + C. albicans – 8,3%, E.coli + Pr. mirabilis- 8,3%, St. aureus + Str. faecalis – 4,2%, St. aureus + Str. faecalis + E.coli -12,5%, Sh. desinteriae E.coli + Sh.boudi -4,2%, E.coli + Ps. aeruginosa – 8,3%, Sh. desinteriae + I. enterocolitica + C. glabrata – 4,1, Sh.

desinteriae + Penicillium citrinum -4,2%, E.coli + Pr. mirabilis + Kl.

cryocrescens + Ps. aeruginosa – 4,2% и др. При этом монокультуры и, особенно, их ассоциации обладали гемолитическими свойствами (43-54% случаев) и положительной реакцией плазмокоагуляции (33-45%), действовали летально на лабораторных животных (31-54%).

Данные исследования показали, что у 45% коров полость матки в первые дни после родов может быть стерильной, свободной от условнопатогенной микрофлоры. У остальных коров она в той или иной степени контаминирована условно-патогенной микрофлорой и основное ее обсеменение происходит в первые 4-5 дней после отела. Также установлено, что у коров больных катаральным эндометритом в 75% случаев в родополовом аппарате находятся ассоциации различных различных условно-патогенных микроорганизмов и только в 25% выделяются монокультуры 62,5% которых составляет кишечная палочка.

При этом монокультуры и, особенно, их ассоциации обладали гемолитическими свойствами, и действовали летально на лабораторных животных.

3.3. Фармакологические свойства препарата 3.3.1. Получение и физико-химические свойства пробиотика.

Приступая к разработке нового профилактического средства, мы принимали во внимание следующие факторы: возникновение послеродового эндометрита происходит на фоне гипотонии, атонии и субинволюции матки, в ее полости скапливается большое количество лохий, которые являются питательной средой для размножения условнопатогенных микроорганизмов.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

- препарат должен, попадая в родополовые пути хорошо приживаться в них, обладать антагонистическим действием по отношению к условно-патогенной микрофлоре.

- Штаммы-пробионты, входящие в состав препарата должны обладать мощным кислотообразующим действием за счет чего они будут действовать бактерицидно.

- препарат не должен вызывать привыкаемости условнопатогенной микрофлоры, аллергических реакций В результате анализа соответствующих литературных данных и разносторонних исследований при подборе компонентов, мы определили следующий состав пробиотического препарата - гипролам В 1 см3 препарата содержится не менее 1х108 КОЕ (колониеобразующих единиц) живых микроорганизмов Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactococcus lactis subsp. Lactis 574.

Таблица 2 Состав пробиотического препарата.

№ Компоненты Количество на 100мл не менее п.п.

5,0х107

1. Lactobacillus fermentum 44/1 5,0х107

2. Lactococcus lactis subsp. Lactis Среда для лактобактерий 100мл.

Гипролам представляет собой жидкость светло-коричневого цвета сероватым осадком на дне флакона. Осадок легко разбивается при встряхивании. Полученный препарат расфасовывают по 100,0 см3 в стерильную герметичную тару, изготовленную из стекла либо полимерных материалов. Стеклянные флаконы укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.

Гипролам хранят в сухом, вентилируемом, защищенном от света помещении при температуре от 2 до 100 С. Срок годности препарата 3 месяца.

3.3.2. Определение жизнеспособности микроорганизмов, входящих в состав препарата гипролам.

Для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в течение срока хранения препарата гипролам были отобраны образцы препарата. Препарат хранили в чистом помещении без доступа света при температуре 2-100 в охладительной камере. В течение срока хранения периодически брались пробы препарата для анализа: на момент выпуска препарата, через 1,5 мес от даты изготовления и через 3 мес от даты изготовления. Анализ проводили путем подсчета жизнеспособных микроорганизмов.

При анализе полученных нами данных мы установили, что препарат гипролам обладает свойством сохранять количество жизнеспособных клеток при хранении до 3 месяцев, сохраняя достаточно устойчивые титры микробных клеток. При дальнейшем исследовании препарата было установлено, что при хранении более 3-х месяцев количество живых клеток падало и препарат не оказывал необходимого профилактического эффекта.

Помимо определения жизнеспособных клеток препарата гипролам нами были проведены исследования по определению изменения рН препарата в течение всего срока хранения. Для этого нами измерялся уровень рН каждые 10дней в течение 3 месяцев со дня производства препарата.

Мы установили, что рН среды препарата гипролам со временем переходит из слабокислой (6,3) в более кислую и к концу срока хранения доходит до 4,9 Проведенные исследования кислотообразующих свойств микроорганизмов входящих в состав гипролама показали, что кислотность по Тернеру готового препарата гипролам изменяется в течение срока хранения. Так на момент выпуска препарата она составляет 99-102 0Т, к двадцатому дню увеличивается до 1220Т, а к моменту окончания срока годности препарата достигает 1800Т, что является критической величиной для микроорганизмов, входящих в состав препарата.

Также нами было определено, что молочнокислые бактерии входящие в состав препарата вырабатывают несколько видов органических кислот - молочная кислота – 3856,8 мг/л, пропионовая кислота- 49,82 мг/л.

3.3.4. Изучение антагонистической активности штаммовпробионтов, входящих в препарат гипролам.

Для изучения антагонистической активности штаммов Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactococcus lactis subsp. Lactis 574 использовали «чашечный» метод М. Литвинова (1947) в модификации Егорова Н.С.

(1965).

Результат учитывали по зоне задержки роста между пробионтом и тест-микробом.

Таблица 3.

Определение антагонистической активности препарата гипролам.

Тест-микробы Зона задержки роста, мм гипролам Lactobacillus Lactococcus lactis fermentum 44/1 subsp. Lactis 574 E.coli 8,3 12,4 16,4 St. aureus 13,3 11,3 19,4 Kl.pneumoniae 8,4 10,3 15,4 Pr.mirabilis 9,2 9,3 10,1 Pr.vulgaris 7,5 7,2 9,6 Ps.aeruginosa 11,3 11,5 14,3 St.epidermidis 12,4 11,7 15,5 Sh.boudi 11,3 10,4 16,6 Str. piogenes 9,3 8,4 15,4 По представленным в таблице 3 данным, каждый из штаммов, входящих в состав данного препарата обладает достаточно высокой антагонистической активностью по отношению тест-культурам, однако нами установлено, что при совмещении двух изучаемых штаммов их антагонистическая активность увеличивается.

3.3.5. Токсикологические свойства препарата.

Оценку острой токсичности изучали в двух сериях опытов.

Животные подбирались и распределялись по группам по принципу парных аналогов, содержались в идентичных условиях кормления и содержания.

В первой серии опыта гипролам вводили подопытным животным перорально путем однократного внутрижелудочного введения с помощью шприца и иглы с наплавленной оливой в дозе 0,1, 0,2, 0,5 мл – мышам и 1, 2, 3 мл - крысам. Концентрация бактериальных клеток в препарате составляла 1x108 КОЕ/мл. В контрольной группе мышам вводили физиологический раствор. О токсическом действии добавки судили по картине физиологического состояния, поведению животных, поедаемости корма.

Во второй серии опыта препарат вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5-1 мл – мышам и 2,5-5 мл - крысам. Концентрация бактериальных клеток в препарате составляла 1x108 КОЕ/мл. О токсическом действии препарата судили по картине физиологического состояния, поведению животных, поедаемости корма.

За животными вели постоянное наблюдение в течение 14 дней, учитывали общее состояние и аппетит. Токсических явлений, отклонений в поведении и гибели у испытуемых животных за весь период наблюдений не отмечали.

В результате проведенных исследований установлено, что гипролам при пероральном и внутрибрюшинном введении в указанных дозах за весь период наблюдения не вызвал гибели и острой интоксикации животных, не влиял отрицательно на их общее состояние и поведение. Рефлексы оставались сохраненными, животные были подвижны с хорошо выраженным аппетитом. При этом нарушений функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения не наблюдали.

Таким образом, на основании проведенных исследований нельзя определить ЛД50 (средне смертельную дозу), а также пороговую дозу (минимальную дозу, при введении которой в организме возникает небольшой, но статистически достоверный сдвиг какого-либо чувствительного интегрального или специфического показателя).

Хроническую токсичность изучали на белых мышах и крысах.

В опыте участвовало 20 беспородных половозрелых белых мышей (10 самцов и 10 самок) массой 20-25г (возраст 2-2,5 мес.),12 половозрелых беспородных белых крыс(6 самцов и 6 самок) массой 150-200г.

Животные были распределены на 2 группы по 10 мышей и 6 крыс в каждой группе.

Мышам первой группы испытуемый препарат вводили в желудок, при помощи шприца и иглы с наплавленной оливой, в дозе 0,3 мл на 1 введение в течение 7 дней. Крысам первой группы препарат вводили в желудок в дозе 2 мл на 1 введение в течение 7 дней. Мыши и крысы второй группы служили контролем, им препарат не вводили.

За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит.

По истечению 7 дней после последнего введения препарата 5 мышей и 3 крысы было подвергнуто эвтаназии и вскрыто, было изучено патологоанатомическое состояние внутренних органов. За остальными 5 мышами продолжали вести наблюдение в течение 3 недель, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит.

При патологическом изучении внутренних органов белых мышей первой группы каких-либо изменений в их структуре не наблюдалось.

На протяжении всего срока эксперимента гибели животных не наблюдалось. Вес мышей и крыс в конце опыта в исследуемых группах существенно не отличался, вес опытных животных незначительно превышал вес контрольных.

Изучение раздражающего действия препарат гипролам проводили в двух сериях опыта. В первой серии опыта раздражающее действие профмастита определяли методом конъюнктивальных проб на трх кроликах альбиносах согласно ГОСТ Р ИСО 10993.10-99.

В ходе исследования были получены следующие результаты:

инсоляция препарата гипролам в нижний отдел конъюнктивального мешка вызывает небольшое покраснение конъюнктивы сразу после введения, которое исчезало через 10 мин. В продолжении дальнейшего наблюдения за животными нами не отмечалось помутнения роговицы глаза, радужная оболочка была без видимых изменений, также не отмечали хематоз (отек конъюнктивы) и выделений из глаз. Во второй серии опыта раздражающее действие гипролама определяли методом накожных аппликаций. Исследования проводили на 3-х кроликах – альбиносах, которым за сутки до эксперимента тщательно выстригали шерсть на симметричных участках обоих боков, один из которых служит контролем. Площадь обрабатываемой поверхности кожи составляла 5 - 8% поверхности тела животного.

На кожу накладывали марлевый тампон, смоченный в тестируемом препарате гипролам, и фиксировали его полупрозрачной повязкой с 4-х-часовой экспозицией. Оценка местного действия препарата на кожу оценивалась сразу после окончания экспозиции, а также через 24, 48 и 72 часа.

В ходе исследования не отмечалось у подопытных животных образование эритемы и отека кожи, в результате чего индекс первичного раздражения равен нулю.

Изучение сенсибилизирующего действия препарат гипролам определяли методом максимального сенсибилизирующего воздействия.

Исследование проводили на морских свинках. За животными вели наблюдение, отмечая наличие на коже в области аппликаций препаратом гипролам отека, эритемы и др.

Нами было отмечено, что спустя 24, 48 и 72 часа после провокационной пробы и снятия повязки положительных реакций кожи (отек, эритема, пузырь) не выявлено.

Таким образом, препарат гипролам не обладает раздражающим и сенсибилизирующим воздействием на ткани в зоне его применения.

–  –  –

использовали препарат моноспорин. В опытной группе коров отмечали задержание последа на 10,2% реже, чем в группе коров, которым применяли моноспорин и на 8,69% реже, чем у коров, где профилактику проводили по принятой в хозяйстве схеме. Количество дней бесплодия у животных, которым вводили гипролам в 1,3 раза меньше, чем у коров, обработанных по схеме хозяйства и препаратом моноспорин.

Следует отметить, что у животных опытной группы при ректальном исследовании наблюдались обильные истечения серокоричневого экссудата из полости матки, который не обладал ихорозным запахом. Было отмечено, что эти истечения выделялись до 15 дней после отела. Инволюция матки наступала на 25-30 дни после отела. При применении гипролама у животных быстрее восстанавливался родополовой аппарат.

Нами проведены морфологические, биохимические исследования крови у коров, подвергшихся профилактике препаратами моноспорин и гипролам.

Проведенный анализ сыворотки крови показал, что сразу после отела у коров наблюдается ряд изменений в биохимических показателях крови. Это проявляется в снижении количества общего белка, значительном повышении AST, щелочной фосфатазы, триглицеридов, снижении уровня кальция, холестерина, каротина. У коров в первый день после отела (фон) выявлено значительное увеличение уровня аспартатаминотрансферазы, что связано с субинволюционными процессами родополового аппарата. Через двадцать дней уровень АСТ снижается до физиологической нормы, как в опытной группе коров, так и в контрольной группе. Нами отмечено, что в контрольной группе и опытной группах происходило увеличение общего белка в крови на 11%, и 13,72% соответственно. Кроме того в опытной группе показатели альбуминов и глобулиновых фракций были в пределах физиологической нормы, что говорит об отсутствии воспалительного процесса в организме.

В контрольной группе отмечено незначительное снижение уровня глобулинов на 0,9% по сравнению с фоном, однако этот показатель был выше физиологической нормы на 1,3%, что говорит о наличии воспалительного процесса в организме животных. При анализе полученных данных можно отметить, что уровень глюкозы, мочевины, креатинина, железа, меди и цинка в крови животных находились в пределах физиологической нормы.

При исследовании гематологических показателей установили, что в опытной и контрольной группе коров количество эритроцитов, было выше, чем в фоновой группе на 13,2% и 11,5% соответственно. Общее количество лейкоцитов у коров опытной и контрольной групп было в пределах физиологической нормы, однако в контрольной группе показатели были выше, чем в фоновой группе на 16,05% и на 24,4% выше, чем в опытной группе. В контрольной группе коров наблюдается увеличение количества нейтрофилов и снижение количества лимфоцитов по сравнению с опытной группой и фоном на 53,4%,46,7% и 29,95, 23,4% соответственно.

Нами проводилась курация животных, заболевших острым послеродовым эндометритом после применения профилактических средств (таблица 5). Отмечено, что курс лечения коров опытной группы сократился на 4,5 дня по сравнению с 1 контрольной группой и на 2,6 дней по сравнению со 2 контрольной группой, а кратность введения препаратов уменьшилось на 78,6% по сравнению с 1 контрольной группой и на 42,9% по сравнению со 2 контрольной группой соответственно. Следует отметить, что количество дней бесплодия у коров опытной группы было на 35,2 дня меньше, чем у коров 1-й контрольной группы и на 23,4 дня меньше, чем в во 2-й контрольной группе животных.

Таблица 5 Результаты терапевтической эффективности при лечении после применения различных схем профилактики Группы Кол-во Дни Крат- Терапев- Кол-во животных заболевших лечения ность тическая дней животных введения эффектив бесплодия ность Опытная группа: 5,0±0,2 2,8±0,1 100,9±2,3 9 100% контрольная 9,5±0,6 5,0±0,3 136,1±2,0 28 89,3% группа:

контрольная 7,6±0,2 4,0±0,1 124,3±1,2 23 91,3% группа:

Кроме того, нами было отмечено, что у животных, заболевших острым послеродовым эндометритом, которых профилактировали гипроламом, уже через 1-2 дня после начала лечения наблюдалось увеличение выделения гнойно-катарального экссудата из родополоваых путей, а на 5 день лечения выделения отсутствовали полностью. В группе животных, в которой для профилактики перед заболеванием применяли рихометрин, гнойно-катаральный экссудат выделялся в небольших количествах до 9-10 дня лечения. В группе заболевших коров, которым для профилактики применяли моноспорин, после начала лечения отмечали увеличение выделений на 4-5 день, а их прекращение на.7-8 день лечения.

По результатам ректального исследования установлено, что сократительная способность в матке у опытных животных восстанавливалась на 2-3 день лечения, в 1 контрольной группе – на 12-13 день, а во 2 контрольной группе на 8-9-день лечения.

Наиболее высокие показатели терапевтической эффективности курса лечения после проведения профилактических мероприятий у коров были достигнуты в группе опытных животных, которым применяли гипролам для профилактики острого послеродового эндометрита.

4.6 Экономическая эффективность применения препарата для профилактики эндометритов у коров.

Применение профилактических мероприятий с препаратом гипролам для профилактики послеродовых эндометритов позволило получить экономический эффект на 1 рубль затрат в размере 0,79 руб.

4. ВЫВОДЫ

1. Заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом в хозяйствах Краснодарского края за период с 2010 по 2013 год в среднем составила 55,4%. Причем процент заболеваемости колеблется в зависимости от типа содержания животных: при круглогодично беспривязном содержании, коровы заболевают послеродовым эндометритом на 10,6% чаще, чем в хозяйствах с привязным содержанием животных, находящихся на пассивном моционе (корпус-баз). Нами установлено, что заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом растет в первые дни, достигая к 5-8 дню 30,6%. В дальнейшем наблюдается тенденция к снижению заболевания до 2% к 20 дню. Установлено, что заболеваемость коров неспецифическим послеродовым эндометритом имеет определенный сезонный характер и колеблется в зависимости от сезона года. Пик заболеваемости наблюдается в зимне-весенний период. И составляет 68,8-64,7%.

2. У здоровых коров пробы маточного содержимого на 1-3 день после отела в 45% случаев являлись стерильными. У 15% коров высевали микроорганизмы, которые были монокультурами стафилококков. У 40% выделяли ассоциации микроорганизмов в различных сочетаниях: E.coli, Kl. pneumonia, Pr. mirabilis, Sh. desinteriae, C. albicans, Ps. aeruginosa, Asp.

flavus.

На 5-8 день у здоровых животных в 65% случаях была выделена микрофлора в монокультуре. В ассоциациях микроорганизмы были выделены у 15% животных. У 20% животных микрофлора не выделена.

К 9-15 дню в основном, (в 55% случаев) выделяли монокультуры В ассоциациях микрофлору выделяли у 30% животных. У 15% животных из содержимого матки микрофлора не выделена. Выделенные микроорганизмы из содержимого матки здоровых животных не обладали гемолитической активностью, были не патогенны для лабораторных животных.

При исследовании маточного содержимого больных эндометритом коров в 25% случаев выделяются микроорганизмы в виде монокультур. Из них 62,5% составляют энтеробактерии, 25% стафилококки, 12,5% шигеллы. Ассоциации микроорганизмов были изолированы у 75% и представлены в различных сочетаниях: E.coli, St. aureus, C. albicans, Pr.

mirabilis, Str. faecalis, Ps. aeruginosa, Kl. cryocrescens и др. При этом монокультуры и, особенно, их ассоциации обладали гемолитическими свойствами (43-54% случаев) и положительной реакцией плазмокоагуляции (33-45%), действовали летально на лабораторных животных (31-54%).

3. Новый пробиотический препарат для профилактики послеродового эндометрита у коров гипролам согласно принятой классификации относится к веществам малоопасным (ІV класс опасности), не оказавыет сенсибилизирующего и раздражающего действия.

В 1 см3 препарата содержится не менее 5х107 КОЕ (колониеобразующих единиц) живых микроорганизмов Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactococcus lactis subsp. Lactis 574., которые обладают выраженным анатагонистическим действие в отношении: E.coli, St. aureus, Kl.pneumoniae, Ps.aeruginosa, St.epidermidis, Sh.boudi.

Микроорганизмы, входящие в состав гипролама сохраняют свою жизнеспособность в течение 3 месяцев.

Применение гипролама для профилактики послеродового эндометрита показано в дозе 100 мл внутрицервикально двукратно в первый и второй день после отела. При такой схеме применения профилактическая эффективность препарата составляет 85 - 88,4% в зависимости от системы содержания животных, количество дней бесплодия колеблется в пределах 86,4-87,3 дня, задержание последа регистрируется в 2,56-3,33%.

4. Экономическая эффективность препарата гипролам при профилактике послеродового эндометрита у 78 коров составляет 24735 руб, а экономический эффект на 1 рубль затрат составляет 0,79 руб.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Для профилактики острого послеродового эндометрита у коров рекомендуется применять новый пробиотический препарат гипролам в дозе 100 мл внутрицервикально двукратно в первый и второй день после отела.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н. Исследования смывов из матки больных эндометритом и здоровых коров в первые дни после отела// Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фармации:

Мат. межрегионал. науч.-практич. конф.– Краснодар, 2012. – 111-113 с.

Новикова Е.Н., Турченко А.Н. О распространении острого 2.

послеродового воспаления матки у коров// Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения: Мат. Междунар. науч.-практич. конф., посвященной 90-летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета – Краснодар, 2011. – 169-171 с.

Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н., Решетка М.Б., 3.

Горпинченко Е.А. Пробиотики в акушерско-гинекололгической практике ветеринарной медицины// Актуальные проблемы современной ветеринарии: Мат. междунар. науч.-практич. конф., посвященной 65летию ветеринарной науки Кубани, ч.1 – Краснодар, 2011. – 95-98 с.

Новикова Е.Н., Турченко А.Н., Коба И.С. Послеродовый 4.

эндометрит коров (Исследования смывов из матки больных эндометритом и здоровых коров в первые дни после отела) //Эффективное животноводство №4(78) апрель 2012 - 35-36 с.

Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н., Решетка М.Б., 5.

Горпинченко Е.А. Пробиотики в животноводстве и ветеринарии Краснодарского края/ Труды Кубанского государственного аграрного университета 1(34), 2012 – 184-186 с.

Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н., Решетка М.Б., 6.

Горпинченко Е.А. Перспектива решения акушерско-гинекологической патологии у коров на промышленной ферме/ Труды Кубанского государственного аграрного университета 1(34), 2012 – 194-196с.

Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н., Решетка М.Б., 7.

Петенко А.И., Горпинченко Е.А. Применение широко используемых в животноводстве пробиотических препаратов для профилактики острых послеродовых эндометритов у коров (на молочных комплексах)// Ветеринария Кубани №3/2012 – 11-13 с.

Коба И.С., Новикова Е.Н. «Гипролам» - новый эффективный 8.

биопрепарат для профилактики послеродового эндометрита у коров//Эффективное животноводство №3(89) март 2013 - 9-10 с.

Новикова Е.Н., Коба И.С., Горпинченко Е.А. Применение 9.

пробиотика Гипролам для профилактики послеродового эндометрита/ Труды Кубанского государственного аграрного университета 1(40), 2013 –

Похожие работы:

«Очаговое повреждение головного мозга у взрослых: синдром спастичности Клинические рекомендации МКБ10: I60/I61/I62/I63/I64/I69; S01/S06/S09.7/S09.8/S09.9; T90.1/T90.5/T90.8/T90.9 2016 (пересмотр каждые 5 лет) ID (заполняется организацией, ответственной за размещение КР) URL (заполняется орган...»

«“Телескоп”: наблюдения за повседневной жизнью петербуржцев No 5, 2003 Бедность в современной России – анализ проблемы1 Михаил Решетников доктор психологических наук, кандидат медицинских наук, профессор Ректор Восточно-Европейского и...»

«mini-doctor.com Инструкция Никвитин 7 мг пластырь трансдермальный, 7 мг/24 часа (с содерж. никотина 36 мг/пластырь) в пакете №7 ВНИМАНИЕ! Вся информация взята из открытых источников и предоставляется исключительно в ознакомительных целях. Никвитин 7 мг пластырь трансдермальный, 7 мг/24 часа (с содерж. ник...»

«Учреждение-разработчик: Департамент здравоохранения города Москвы, Государственное бюджетное учреждение здравоохранения "Научно-практический центр медицинской радиологии Департамента здравоохранения города Москвы"Составители: А.В. Годзенко, А.В. Петряйкин, С.Ю. Ким, С.П. Морозов, К.А. Сергунова, Н.В. Иванникова, А.В. Воро...»

«Ганс Рюш 1000 врачей (и гораздо больше) против вивисекции Hans Ruesch. 1000 doctors (and many more) against vivisection. CIVIS, 1989. – 281 p. Переводчик Анна Кюрегян, редакторы Инна Агаева и Екатерина Каллистова. Центр защиты прав животных "Вита", 2010-2011. Перевод на русский язык сделан с люб...»

«mini-doctor.com Инструкция Инфасурф суспензия для интратрахеального введение, 35 мг/мл по 3 мл во флаконе ВНИМАНИЕ! Вся информация взята из открытых источников и предоставляется исключительно в ознакомительных целях. Инфасурф суспенз...»

«ГОУ ВПО "Северный государственный медицинский университет (г. Архангельск) Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" "Согласовано" "Утверждаю" Зав. кафедрой Декан факультета д.м.н. Матвеев Р.П. _ "12" декабря 2008 г. "_"200 г. Р...»

«Таганская площадь, Театр на Таганке, Церковь Николая Чудотворца, Здание Библиотеки фонда Русское Зарубежье", Верхняя Радищевская улица, мемориальные доски, Яузская улица, Усадьба И.Р. Баташёва, Шепелевых и Голицыных (Городская клиническая больница №23 имени "Медсантруд"), Всероссийская государственная библиотека Ин...»

«Феськова Анна Александровна КАЧЕСТВО ЖИЗНИ, ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ И ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ С СУБКЛИНИЧЕСКИМ ГИПОТИРЕОЗОМ 14.01.04 внутренние болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ме...»

«Почему непунктуальные люди непунктуальны Говорить злостному нарушителю рабочего расписания "Просто постарайся не опаздывать" — все равно что советовать больному депрессией "Ну же, давай приободрись". Джозеф Феррари, психолог Нью-Йорк. Этот человек еще не занима...»

«1 Краткие рецензии (вместо предисловия) В данном издании книги проф. И.А.Шамова, в отличие от прошлых, нашли отражение такие важные для биомедицинской этики темы, как экстракорпоральное оплодотворение и связанные с ним позитивная и негативная евгеника, этические вопросы генетической паспортизации...»

«МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНА # 2(9) 2016 ТЕМА НОМЕРА СТРАНИЦА ГЛАВНОГО СПЕЦИАЛИСТА ВРАЧ ОБЩЕЙ ПРАКТИКИ Виктор ФОМИН и Григорий АРУТЮНОВ размышляют о перспективах развития института ВОП 3 КЛИНИЧЕСКАЯ ПРАКТИКА 1 ОТ ПЕРВОГО ЛИЦА Материалы февральской и мартовс...»

«Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Волгоградский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Медицинский колледж Методические рек...»

«Целью изучения дисциплины является: 1.Овладение основными теоретическими и клиническими представлениями о функционировании опорно-двигательного аппарата, оценки влияния факторов внешней и внутренней среды с позиции неврологии и мануальной терапии, овладение основными знаниями о базовых пальпаторных навыках в мануальной диагностике, фор...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ ХАРЬКОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Т.В.ЧАЙЧЕНКО Современные подходы к организации питания и физической активности детей с нормальной и избыточной массой тела У...»








 
2017 www.kniga.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн материалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.