WWW.KNIGA.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Онлайн материалы
 

«(51) МПК C12N 1/20 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21)(22) Заявка: 2011137822/10, ...»

RU 2 482 175 C1

(19) (11) (13)

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(51) МПК

C12N 1/20 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

(21)(22) Заявка: 2011137822/10, 14.09.2011 (72) Автор(ы):

Григораш Александр Ильич (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Макланов Анатолий Иванович (RU), 14.09.2011 Воробьева Галина Ивановна (RU), Самойленко Владимир Александрович (RU),

Приоритет(ы):

Окунев Олег Николаевич (RU), (22) Дата подачи заявки: 14.09.2011 Зайцев Владимир Владимирович (BY), RU (45) Опубликовано: 20.05.2013 Бюл.

№ 14 Якшина Татьяна Васильевна (RU) (56) Список документов, цитированных в отчете о (73) Патентообладатель(и):

поиске: RU 2227158 С2, 20.04.2004. RU 2289954 Общество с ограниченной С2, 10.05.2006. RU 2177699 C1, 10.01.2002. RU ответственностью "Гелла-Фарма" (RU) 2259209 С2, 20.08.2004. US 20100093061 A1, 15.04.2010.

Адрес для переписки:

143988, Московская обл., г.

Железнодорожный, мкр. Павлино, 4, кв.39, В.В.Шарову

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТИМУЛЯТОРА РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ

C1 C1 (57) Реферат: культуральную жидкость подтитровывают Способ получения стимуляторов роста соляной кислотой до рН=4,0-4,5, нагревают в микроорганизмов включает выращивание течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в штаммов грибов Fusarium sambucinum MKF- течение 2 часов, остужают в течение 1,0-1,5

–  –  –



1. Область техники Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к микробиологии, и может быть использовано при получении питательных сред биологически активных веществ.

2. Уровень техники Известен способ выращивания дрожжей в условиях аэрации на минеральных питательных средах, содержащих источники углерода, азота, фосфора и микроэлементов с использованием в качестве стимулятора роста дрожжей одной или нескольких а-аминокарбоновых кислот, смешанных с отдельными аминокислотами, такими как аргинин, лейцин и лизин, а также витаминами группы В, особенно пиридоксином и пантотеновой кислотой (патент Франции №1538957, кл. С12С, 1969 г.).

Недостатком этого способа является высокая стоимость исходных продуктов.

Известен способ выращивания дрожжей с использованием в качестве стимулятора роста кротонбетаина и бутилбетаина (патент Японии №5417026, кл. С12С 11/08, 1979 г.).

Однако действие этих стимуляторов проверено только в периодических режимах выращивания дрожжей путем встряхивания колб при низких концентрациях биомассы.

Другим недостатком известного способа является значительный расход кротонбетаина и бутилбетаина, который составляет 0,1 мг на 1 л питательной среды.

Известен способ получения экстракта кормовых дрожжей, в котором кормовые дрожжи смешивают с водой, кипятят при постоянном перемешивании и фильтруют (RU 2084171, М. кл 6: C12N 1/00, 1/14, 20.07.1997 г.).

Недостатком указанного способа является длительность процесса фильтрации, наличие взвешенных частиц и высокая пигментация экстракта.

Наиболее близким аналогом предлагаемого способа по признакам изобретения и достигаемому эффекту, принятым в качестве прототипа, является способ получения стимуляторов роста микроорганизмов из кормовых дрожжей, в котором кормовые дрожжи смешивают с водой с последующим кипячением, добавляют к экстракту натрий фосфорнокислый двузамещенный, перемешивают до полного растворения соли, подщелачивают до рН 7,2-8,3, после чего добавляют хлористый кальций, подщелачивают до рН 6,7-7,1, кипятят в течение часа, фильтрат концентрируют и высушивают (RU №2227158, М. кл. 7: C12N 1/00, 1/14, 22.07.2002 г.).





Недостатком прототипа является ограниченная производительность и значительная длительность процесса.

3. Раскрытие изобретения Задачей изобретения является интенсификация роста микроорганизмов, используемых в биотехнологических производствах пробиотиков, производстве ферментов, в производстве кормовых белковых продуктов и т.д.

Поставленная задача достигается тем, что в способе получения стимулятора роста микроорганизмов выращивают грибы рода Fusarium sambusinum штаммов MKF-2001-3 или BKMF-3051D на среде, содержащей источник углерода - 3-4%, азота - 0,2-0,3%, фосфора - 0,2-0,3% и микроэлементы - 0,07-0,08% в стерильных условиях при температуре 26-30°С с перемешиванием и аэрацией в течение 40-48 часов, суспензию гриба и/или культуральную жидкость подтитровывают соляной кислотой до рН=4,0нагревают в течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в течение 2 часов, остужают в течение 1,0-1,5 часов до комнатной температуры, полученная таким образом суспензия и/или культуральная жидкость является стимулятором роста микроорганизмов.

.: 3

–  –  –

4. Осуществление изобретения Заявленный способ получения стимулятора роста микроорганизмов осуществляют следующим образом: выращивают грибы рода Fusarium sambusinum штамов MKF-2001или BKMF-3051D на среде, содержащей источник углерода 3-4%, азота - 0,2-0,3%, фосфора - 0,2-0,3% и микроэлементы - 0,07-0,08% в стерильных условиях при температуре 26-30°С с перемешиванием и аэрацией в течение 40-48 часов.

При этом основные из указанных технологических операций производят при следующей детализации процессов и параметров.

Суспензию гриба подтитровывают соляной кислотой до рН=4,0-4,5, нагревают в течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в течение 2 часов, остужают в течение 1,0-1,5 часов до комнатной температуры, вносят стимулятор в количестве 0,002-0,8% от объема питательной среды.

Культуральную жидкость отделяют фильтрованием от биомассы, подтитровывают соляной кислотой до рН=4,0-4,5, нагревают в течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в течение 2-х часов, остужают в течение 1,0-1,5 часов до комнатной температуры, вносят стимулятор в количестве 0,1-8,0% от объёма питательной среды.

Примеры реализации способа.

Пример 1. Готовят питательную среду, для чего 37,5 г дерти и 87,5 г ржаных отрубей заливают 875 мл водопроводной воды.

Гидромодуль: твердая и жидкая фракция: 1:7.

Питательную среду подвергали термообработке на кипящей водяной бане в течение 4-х часов при рН=6,7. После термообработки смесь охлаждали до 35°С, с помощью 10% серной кислоты доводили рН до 5,0 и добавляли соли: (NH4)2SO4 - 5 г/л и КН2РO4 - 1,5 г/л. В полученную среду вносили ферментный препарат глюкавамарин.ГЗХ. Ферментолиз проводили в течение 5 часов, после чего полученный ферментолизат анализировали (на содержание сахаров - РВ), разливали по колбам; в количестве 200 мл в каждую колбу.

Колбы с питательной средой стерилизовали в течение 40 мин при 0,5 атм. После стерилизации питательной среды колбы охлаждали до 30°С и вносили в питательную среду биостимулятор.

Дрожжи Saccharomyces cerevisiae diastaticus ВКПМ-у-1218 выращивали в колбах на качалке в течение 24 часов при температуре 32°С и скорости перемешивания среды 240 об/мин. После выращивания биомассы дрожжей в колбах с биостимулятором концентрация сахаров (РВ) снизилась с 6 г/л до 0,4 г/л, в контрольных колбах она была в пределах 0,6-0,7 г/л. В опытных колбах количество биомассы дрожжей было 3,5 г АСВ, в контроле - 2,9 г/л, т.е. на 20,67% меньше. Содержание сырого протеина в целевом продукте составило 42,8%, тогда как в контроле - 41,4%.

Пример 2. Дрожжеподобный гриб Trichosporon cutaneum ВСБ-775 выращивали на той же питательной среде, что и в примере 1, в колбах на качалке в течение 36 часов, используя биостимулятор в количестве 0,1% объема.

В итоге определяли количество выращенной биомассы, степень ассимиляции сахаров (РВ) и содержание сырого протеина в биомассе гриба.

В опытных колбах количество накопленной биомассы было в пределах 4,0-4,2 г АСВ, а в контрольных - 3,7-3,8 (+9,33%). Содержание сырого протеина в опытных образцах биомассы было 43,2%, а в контрольных - 41,8% (+3,35%).

Пример 3. Проводили испытания биостимулятора при выращивании дрожжейсахаромицетов на ферментолизате зерносырья.

Выращивание дрожжей-сахаромицетов (S. cerevisiae diastaticus BKПМ-у-1218)

–  –  –

рН до засева - 7,0-7,2.

В контроле биостимулятор в среду не вносили. Культивирование вели при 37°С при непрерывном перемешивании и аэрации. Процесс вели до повышения уровня рН среды до 8,6-8,8 и появления свободных спор.

В контрольном аппарате продолжительность выращивания - 48-72 ч, образование спор 10-20%. В опытном аппарате - продолжительность выращивания - 26-28 ч, образование спор в 95-100% клеток.

Пример 6. Выращивание клеток Bacillu.

subtilis ГА-13, компонента бакпрепарата биокомпоста проводили в ферментере БИОР-01 объемом 100 л. Рабочий объем составлял 50 л.

В аппарат заливали около 40 л водопроводной воды, вносили компоненты питательной среды по прописи (г/л) примера 5, биостимулятор в объеме 2,5 л (5%).

В контроле биостимулятор в питательную среду не вносили. Культивирование вели при 37°С при непрерывном перемешивании и аэрации до повышения уровня рН среды до 8,6-8,8 и появления свободных спор.

В контрольном аппарате продолжительность выращивания - 48-52 ч, образование спор 20-30%. В опытном аппарате - продолжительность выращивания - 25-27 ч, образование спор в 95-100% клеток.

Пример 7. Мицелиальный гриб Penicilliun verruculosum выращивали на питательной среде, содержащей источники угрерода, азота и минеральные соли, перед стерилизацией в среду добавляют 5-8% биостимулятор, затем культивировали в течение 120 ч на качалке при температуре 29°С и постоянном перемешивании, в процессе ферментации отбирали пробы и в фильтрате культуральной жидкости определяли активность карбогидраз (целлюлаз и ксиланаз).

Продукция (активность) ферментов в присутствии биостимулятора повышалась на 20% для целлюлаз и 25% для ксиланаз.

Пример 8. Дрожжи S.

cerevisiae diastaticus (ВКПМ-у-1218 выращивали при непрерывном режиме в промышленном аппарате V-900 м 3 (Vpaб - 450 м 3) на ферментолизате зерносырья.

Количество подаваемого биостимулятора составляло 0,002% от объема протока в час.

Основной эффект заключался в сокращении времени выращивания с 8,2 часа до 6,6 часа или на 24,24%. Количество АСВ возросло на 4,88%. Качество целевого продукта кормового продукта оценивалось по содержанию сырого протеина, +4,44%, и белка по Барнштейну - +6,04%. Количество производимого кормового продукта выросло с 80,7 до 113,7 тонн в сутки, т.е. на 40,9%. При этом расходный коэффициент по зерносырью снизился с 1,55 т/т до 1,37 т/т.

Необходимо отметить также, что физиологическое состояние дрожжевых клеток характеризовалось активным почкованием (50-60%) и гомогенной протоплазмой. В связи с глубокой утилизацией субстрата (углеводов) в последней секции наблюдалось значительное количество вакуолизированных клеток.

.: 6 RU 2 482 175 C1 Пример 9. Провели выращивание лептоспир серотипов Помона, Иктерогеморрагия, Тарассови на стандартной сывороточной среде (контроль) и на сывороточной модифицированной среде, содержащей 5% биостимулятора (опыт) при температуре 28°С в течение 10 суток.

Опытную серию вакцины готовили из культур лептоспир, выращенных на модифицированной сывороточной среде и содержащих 450-500 млн м.к. см 3, путем их смешивания.

Контрольную серию вакцины готовили из культур лептоспир, выращенных на сывороточной среде и содержащих 85-95 млн м.к. см 3, путем их концентрирования до содержания 500 млн м.к. см 3 и последующего смешивания.

Культуры лептоспир инактивировали в присутствии 0,1% формальдегида в течение 5 суток при температуре 37°С. В период опытной работы было изготовлено по 3 серии опытной и контрольной вакцины против лептоспироза объемом 2 дм 3 каждая.

Серии вакцины против лептоспироза контролировали на стерильность, безвредность и активность по принятым стандартным методикам.

Результат.

Объединенную пробу вакцины 29 августа 2009 г. ввели в дозе 1,0 см 3 внутримышечно пяти кроликам серой окраски массой 2,8-3,0 кг.

Через 25 суток у иммунизированных кроликов из ушной вены произвели забор крови в объеме 5,0 см 3. Сыворотки, полученные из крови кроликов, исследовали в реакции микроагглютинации с культурами штаммов лептоспир, входящих в состав вакцин.

Провели учет результатов в реакции микроагглютинации.

В сыворотке крови кроликов, иммунизированных контрольной концентрированной культурой лептоспир, установили наличие специфических антител к лептоспирам Помона и Тарассови - 1:

200 и Иктерогеморрагия 1:50.

В сыворотке крови кроликов иммунизированных опытной культурой лептоспир, выращенных в присутствии биостимулятора, выявлены антитела к лептоспирам Помона и Тарассови 1:400 и Иктерогеморрагия 1:100.

Выводы: включение биостимулятора в состав питательной среды для культивирования лептоспир существенно повышает накопление лептоспир и биосинтез специфических антигенов.

Пример 10. Гриб Fusarium sambucinum штамма MKF-200-3 выращивали на среде, содержащей в качестве основного источника углерода сахарозу (3-4%, на мелассе, содержащей сахарозу).

В мелассу вносят дополнительно сульфат аммония (NH4)2SO4 в количестве 5 г/л (0,5%) и фосфат калия (KH2PO4) в количестве 3,5 г/л (0,35%).

Что касается необходимых микроэлементов (Zn, Mg, Mn, Fe и др.), то они содержатся в мелассе и дополнительно не вносятся.

Выращивание в аппарате V-30 л (полезный объем 20 л) проводили в течение 48-ми часов при следующим параметрам: t=30°C, pH=5,0.

Суспензию гриба подтитровывали соляной кислотой до рН=4,2, нагревали в течение 1,5 часов до 115°С, выдерживали в течение 1,3 часа до комнатной температуры, вносили стимулятор в количестве 0,05%, т.е. на полезный объем аппарата V-30 - 100 мл. Полученная суспензия гриба является заявленным биостимулятором.

5. Технические результаты.: 7 RU 2 482 175 C1 Преимуществом заявленного предложения по сравнению с прототипом является существенная интенсификация роста микроорганизмов за счет стимулирования биологической активности их факторов роста. Использование стимуляторов роста в процессе получения биомассы как при периодическом, так и при непрерывном культивировании приводит к более полной утилизации субстрата, что позволяет повышать выход целевого продукта при сниженных расходных коэффициентах по источнику углерода и электроэнергии. Объемы кормовых и других целевых продуктов за счет использования предлагаемого стимулятора увеличивались до 40% и более при сокращении времени выращивания до 50%.

Формула изобретения Способ получения стимулятора роста микроорганизмов, предусматривающий выращивание штаммов грибов Fusarium sambucinum MKF-2001-3 или Fusarium sambucinum BKM F-3051D на среде, содержащей источник углерода - 3-4%, азота - 0,2фосфора - 0,2-0,3% и микроэлементы - 0,07-0,08% в стерильных условиях при температуре 26-30°С с перемешиванием и аэрацией в течение 40-48 ч, полученную суспензию гриба или культуральную жидкость подтитровывают соляной кислотой до pH=4,0-4,5, нагревают в течение 1,0-1,5 ч до 115°С, выдерживают в течение 2 ч, остужают в течение 1,0-1,5 ч до комнатной температуры.

.: 8

Похожие работы:

«НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ Серия Медицина. Фармация. 2013. № 11 (154). Выпуск 22/1 43 УДК 616.314.17008.1085: 618.3053.1071.1 РАЗЛИЧИЕ В СРОКАХ ПРОРЕЗЫВАНИЯ ВРЕМЕННЫХ ЗУБОВ У ДЕТЕЙ С ДИАГНОЗАМИ РОЖДЕННЫЙ ДО СРОКА, ПРЕНАТАЛЬНАЯ ГИПОТРОФИЯ И СИНДРОМ ЗАДЕРЖКИ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ О.В. ГАРМАШ1 Н.В. ЛИХАЧЕВА2 В.М. ХИЖНЯК3 А.А. КОПЫТОВ4...»

«Аюрведическая фармакология Основы Семь категорий аюрведы Дравйа (субстанция) 1. Гуна (свойство) 2. Раса 3. Вирйа 4. Випака 5. Прабхава 6. Карма (действие) 7. Дравйагунавигняна – естественная наука Дравйагуна...»

«РЕД: 02 PA 7.5.1 ДАТА: 20.12.2013 Аналитическая Программа СТР. 3/3 Одобрено Одобрено на заседании Совета Факультета Медицины 1, Дисциплина "Внутренние Болезни", Протокол Nr._ от_ Протокол Nr._ от_ Заведующий...»

«АТЛАС НОВЫХ ПРОФЕССИЙ Версия 1.5 Москва 2014 СОДЕРЖАНИЕ Предисловие................................................... 3 Часть I. Профессии будущего.................................. 27 Биотехнологии.........................»

«mini-doctor.com Инструкция Винпоцетин таблетки по 5 мг №50 (10х5) ВНИМАНИЕ! Вся информация взята из открытых источников и предоставляется исключительно в ознакомительных целях. Винпоцетин таблетки по 5 мг №50 (10х5) Действующее вещество: Винпоцетин Лекарственная форма: Таблетки...»

«КЛІНІЧНІ ВИПАДКИ УДК 616-053.31.-07:575.1 Недержание пигмента (Блоха – Сульцбергера синдром): случай из практики Л.А. Болотная Харьковская медицинская академия последипломного образования Резюме В статье приведены данные литературы и собственное клиническое наблюдение за новорожденным ребенком с редк...»

«mini-doctor.com Инструкция Лазолван пастилки по 15 мг №40 (10х4) ВНИМАНИЕ! Вся информация взята из открытых источников и предоставляется исключительно в ознакомительных целях. Лазолван пастилки по 15 мг №40 (10х4) Действующее вещество: Амброксол Лекарственная форма: Таблетки Фармакотерапевтическая группа: Средства, п...»








 
2017 www.kniga.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн материалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.